Флотация кала – копрологический метод, используемый чаще всего. С помощью этого метода проводят полное паразитологическое исследование кала на паразитозы протозойного и гельминтозного характера. Он основан на принципе использования флотационных растворов, у которых более высокая удельная плотность, чем у паразитов. Таким образом, при исследовании образца кала разные стадии биологического цикла паразита всплывают на поверхность содержимого пробирки и концентрируются в поверхностном слое.
Запас флотационного раствора готовится в лаборатории. Для плотоядных рекомендуется использовать в качестве флотационной среды раствор Шеатера – раствор сахара с удельной плотностью 1,15 г/см3. Его использование особенно подходит для протозойных возбудителей (ооцисты кокцидий, цисты лямблий и т. п.), потому что он более доступен и в нём не происходит деформации поверхностных структур паразита. В поверхностном слое находят как яйца гельминтов, так и фрагменты ленточных гельминтов, а также можно использовать этот раствор для общего паразитологического исследования.
Раствор Шеатера готовится нагреванием 500 мл воды и 750 г свекольного сахара. Таким образом, получают насыщенный раствор сахара. Приготовленный таким образом раствор можно хранить в холодильнике длительное время. Нужное количество разбавляют водой, хорошо перемешивают и одновременно используют ареометр для достижения необходимой удельной плотности, то есть 1,15 г/см3. К приготовленному подобным образом раствору добавляют 0,7 мл фенола на 100 мл раствора для предотвращения роста плесени. Раствор переливают в бутылку и хранят при комнатной температуре или в холодильнике.
Ещё один часто используемый флотационный раствор – раствор Бреза, удельная плотность которого 1,25 – 1,30 г/см3. Его использование может способствовать деформации тонких оболочек, особенно у простейших. Поэтому приготовленные образцы исследуют, как можно, быстрее, потому что со временем деформация оболочек увеличивается и делает невозможной правильную постановку диагноза.
Для приготовления раствора Бреза готовят насыщенный раствор сульфата магния, который получают растворением 1 кг MgSO4 в 1 литре горячей воды и небольшой избыток оставляют выкристаллизовываться на ночь. Насыщенный раствор тиосульфата натрия (Na2S2O3) получают при разведении 2 кг соли в 1 литре горячей воды. Для приготовления собственно флотационного раствора смешивают 3 части насыщенного раствора сульфата магния с тремя частями раствора тиосульфата натрия и 1 частью воды. Можно также использовать другой метод: в 1 литре воды растворяют 725 г MgSO4, а в 1 литре воды – 1425 г Na2S2O3. Растворы нагревают до кипения и оставляют охладиться. На следующий день растворы фильтруют. После смешивания растворов в соотношении 1:1 разбавляют водой для получения необходимой удельной плотности 1,25 – 1,30 г/см3.
Для исследования кала флотационным методом отбирают образец размером с грецкий орех, заливают водой в ступке и растирают до кашицеобразной консистенции. Процеживают через марлю в химический стакан, стараясь максимально отфильтровать примеси. Наливают в центрифужные пробирки, и центрифугируют 2 – 3 минуты при 1500 – 2000 об/мин. Потом сливают надосадочную жидкость и к осадку добавляют выбранный флотационный раствор. Содержимое пробирки тщательно перемешивают и встряхивают. Центрифугируют ещё раз 2 – 3 минуты при 1500 – 2000 об/мин. Пробирку ставят в штатив на 10 – 15 минут, после чего поверхностный слой аккуратно переносят петлёй на предметное стекло и микроскопируют. При исследовании образец не должен засыхать.
Начинают просматривать под малым увеличением (объектив, увеличивающий в 4 – 10 раз), а потом переводят на среднее увеличение (х 16 – 20). Использование большего увеличения (х 40 – 45) нужно, прежде всего, для диагностики простейших, стадии которых при малом увеличении не заметны. Для точного определения отдельных паразитов необходимо использовать окуляр с линейкой. Можно, правда, составить сравнительную таблицу и ориентироваться по ней, однако всегда есть риск неточной идентификации. Если взять за основу обычное и относительно часто встречающееся яйцо рода Toxocara размером 90 мкм, потом вывести приблизительный размер (например, половину или треть). Однако необходимо также помнить меняющуюся величину объектов при различных увеличениях. Сравнивают только ориентировочно, а при малых увеличениях высока опасность ложной идентификации (например, у кошек надо быть осторожным при диагностике Isosporarivolta и Toxoplasma gondii!).
